在表观遗传学研究中,寻找转录因子的调控位点是困扰科学家的难题,经典的技术存在很多弊端,最主要的是抗体问题,对于非模式植物更难入手。
与相比,将蛋白质体外表达技术与高通量测序技术相结合,不需要针对每个转录因子制备特异性抗体,所以具有快速、高通量、节约时间成本等显著优势。
是研究非模式植物顺反组和表观组的有力技术,大大扩展和加深了科学家们研究的转录因子结合位点信息。
它能够捕获全部转录结合位点,因此能获得完整的密码本。
并且,无需复杂和专门的实验设备,这种方法可用于所有模式或非模式植物。
这为我们提供了一扇窗口,来发现调控序列中表观遗传变异影响植物性状的机制。
流程:
构建体外蛋白表达载体→体外蛋白表达→DNA文库构建→亲和纯化→上机测序
下图是体外蛋白表达载体构建的protocol